Экдистероиды, обладающие высокой биологической активностью, эффективны в составе адаптогенных и ранозаживляющих лекарственных препаратов. Однако их широкое использование сдерживается ограниченными запасами растительного сырья и высокой стоимостью. Одним из путей повышения эффективности препаратов является создание пролонгированных форм на основе липосом. В нашей лаборатории первые исследования липосомальных суспензий, содержащих экдистероиды, были предприняты в 1996 г., хотя идея возникла еще в 1992 г. Известно, что в природе экдистероиды встречаются как в свободном виде, так и в виде конъюгатов, в том числе эфиров уксусной и высших жирных кислот. В то время как свободные экдистероиды играют роль гормонов линьки и метаморфоза насекомых и членистоногих, неполярные конъюгаты служат запасными формами гормона и резервируются в вителлинах яйцеклеток взрослых особей. Активация гормона происходит) когда это необходимо, путем деацилирования эстеразами. Накопление экдистероидов в виде свободных гормонов служит сигналом для начала митотических делений яйцеклетки. Этот принцип обратимого конъюгирования экдистероидов с неполярными соединениями, происходящий в организме беспозвоночных, мы решили применить для повышения эффективности включения экдистероидов в липидный бислой липосом с целью создания липосомального экдистероидсодержащего препарата, обладающего потенциальными ранозаживляющими свойствами. В предложенной нами молекулярно-инженерной конструкции липосомы моделируют органеллы яйцеклетки насекомого, в которых содержится неактивная форма гормона. В пользу такого подхода свидетельствовал и тот факт) что многие стероидные гормоны в организме позвоночных также находятся в виде эфиров жирных кислот в гидрофобных тканях. Конъюгирование защищает их от метаболизма, а активация гормона происходит при гидролизе эстеразами. Анализ данных литературы показал, что группой французских ученых во главе с А.Мебеком была предпринята попытка создания липосомальной композиции на основе 20-гидроксиэкдизона (20Е) и его ацетатов, обладающей антистареющим и ранозажив-ляющим действием (Meybeck, 1991). Было установлено, что при использовании 20Е в липосомальной форме заживление ран у крыс ускоряется более чем в два раза. Однако исследований по определению степени включения, механизма встраивания экдистероидов в липосомы проведено не было. Мы провели исследования по определению включения 20Е в липосомы, которое оказалось довольно низким: 6% от исходного содержания 20Е в липосомальной суспензии. Было высказано предположение, что из-за гидрофильной природы включение его в липосомы возможно только при захвате во внутреннее водное пространство, что объясняет такой низкий процент включения. Следовательно, необходимо придать молекуле 20Е гидрофобные свойства, прибегнув к его химической модификации. Мы исследовали липосомальные суспензии, содержащие три- и тетраацетаты 20Е. Оказалось, что степень включения триацетата еще ниже .чем 20Е, а тетраацетат не инкапсулировался совсем. Мы пришли к заключению, что недостаточно просто гидрофобизовать молекулу 20Е, необходимо ввести в ее состав фрагмент, обладающий мембранотропными свойствами. Правильность выбранного нами биомиметического под-хода (моделирование событий, происходящих в природе), широко используемого в биотехнологии, подтвердилась в экспериментах с липосомальными суспензиями, содержащими трипальмитат 20Е. Конъюгирование 20Е с пальмитиновой кислотой привело к желаемому увеличению степени включения этого конъюгата в липосамы. Мы провели эксперименты по определению гидролитической лабильности конъюгатов 20Е, что является необходимым для реализации их биологической активности. Оказалось, что 2,3,22,25-тетрааце-тат 20Е расщепляется до свободного 20Е после обработки комплексным препаратом ферментов Helix, обладающим эстеразной активностью, уже на второй день. Попытки провести гидролиз 2,3,22-три-пальмитата 20Е тем же ферментом не увенчались успехом. Нужен был новый фермент, способный отщеплять жирнокислотные остатки на поверхности раздела фаз в суспензии мицелл трипальмитата (он не растворим в воде). Таким ферментом оказалась панкреатическая липаза. С ее помощью удалось провести гидролиз трипальмитата за 5 дней. Любопытно, что в параллельном опыте по гидролизу трипальмитата в липосомальной скорме высвобождение 20Е происходило медленнее. Это позволяет нам говорить о возможности пролонгированного действия препарата. Логическим завершением исследования станет оценка биологической активности препарата в экспериментах in vivo. асп. Е.Пшунетлева
Логотип -
Начало -
Общие
сведения -
Структура -
Научная деятельность 2693 посещений с 18.12.2001 |